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菌種保存

保存菌種用的培養(yǎng)基必須能維持使微生物長期生存且不出現(xiàn)生長或新陳代謝過于旺盛的情況，菌株能較長時間存活且保
持性狀穩(wěn)定。

1.菌種保存的注意事項
(1)不能用含有可發(fā)酵性糖的培養(yǎng)基保存菌種。
(2)不可以使用選擇性培養(yǎng)基，不能從藥敏試驗平板培養(yǎng)基上留取菌株。
(3)不可使培養(yǎng)菌干枯，所有試管要保持良好的密封性。
(4)對溫度變化敏感的細(xì)菌，如淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌，不可貯存于冰箱，但可用快速冷凍干燥法長期保存。
(5)作為抗菌藥物敏感試驗用的標(biāo)準(zhǔn)菌株，由保存狀態(tài)取出后，不能連續(xù)使用1 周以上，應(yīng)定期傳代，但一般不超過6 次，必要時進(jìn)行更換。

2.菌種保存的方法
保存菌種的方法，應(yīng)根據(jù)菌種的類型和保存目的進(jìn)行選擇，一般包括以下幾種方法：
(1)培養(yǎng)基保存法：此法不需要特殊設(shè)備，并可隨時提供使用，為常用的一種保存方法，其缺點(diǎn)是易發(fā)生變異。營養(yǎng)要求
不高的細(xì)菌，可用半固體保存法，一般2～3月轉(zhuǎn)種1次，并檢查菌株特性，如特性已改變，則需丟棄。特殊培養(yǎng)要求的細(xì)菌，如流感嗜血桿菌可接種巧克力瓊脂斜面，密封后冰箱貯存，每2周轉(zhuǎn)種1次。淋病奈瑟菌保存于巧克力瓊脂，每天或隔天轉(zhuǎn)種1 次，不宜4 ℃冰箱保存，因易死亡。
(2)快速冷凍法：將純培養(yǎng)細(xì)菌在液體培養(yǎng)基上增菌后，取數(shù)個新鮮菌落加入含小牛血清或脫纖維綿羊血的培養(yǎng)基內(nèi)制成濃菌懸液，再放人無菌玻璃珠，將此瓶放入－30℃以下低溫冰箱保存。需要時用無菌鑷子取出1 粒玻璃珠置增菌培養(yǎng)液中，增菌培養(yǎng)后即可獲得新鮮菌種。用此方法，大部分細(xì)菌可保存6 ～12 月，甚至更長時間。
(3)冷凍干燥法：是菌種保存最佳方法，可以免去細(xì)菌因頻繁傳代而造成菌種污染、變異和死亡。此法需冷凍干燥設(shè)備，操作較費(fèi)時，但適用于需要長期保存的菌種。
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菌種管理

(1)實(shí)驗室保存菌種需按規(guī)定時間轉(zhuǎn)種，每轉(zhuǎn)種3代作一次鑒定，并有詳細(xì)記錄卡，包括菌種名稱、編號、來源、保存日期、傳代情況等。
(2)實(shí)驗室保存菌株不得擅自處理或帶出實(shí)驗室，如確需要帶離實(shí)驗室，須經(jīng)上級領(lǐng)導(dǎo)批準(zhǔn)，并做好詳細(xì)的記錄。
(3)菌種應(yīng)有專人保管，如遇工作調(diào)動，應(yīng)及時做好交接工作。

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